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一、人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的分離1.3ml抗凝血加入3ml1×PBS進(jìn)行稀釋。2.在15ml離心管內(nèi)加入3ml淋巴細(xì)胞分離液，再在液面上方平鋪3ml稀釋過的抗凝血，常溫下，水平離心機(jī)600g，離心30min。3.吸取中間白膜層細(xì)胞，加入15ml離心管中，再加入10ml1×PBS混勻，常溫下，1000rpm，離心10min，棄上清，每管加入2mlMACS緩沖液重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞數(shù)量，每個(gè)樣本不超過107個(gè)細(xì)胞。4.2000rpm，離心3min，棄上清。二、磁珠分選...

1.6-8周齡雄性BALB/c小鼠；2.致敏階段：在第1、8和15天，通過腹腔注射300ul的混合液，其中包含50ugOVA和1mg氫氧化鋁溶于PBS中。3.激發(fā)階段：在第22天，開始鼻內(nèi)激發(fā)。使用10mg/mL的OVA溶液，每側(cè)鼻孔滴入20μL，每天1次，連續(xù)激發(fā)7天。4.行為學(xué)評(píng)估：①撓鼻②打噴嚏③清水樣涕5.鼻粘膜的HE染色，有炎性細(xì)胞侵潤。上海達(dá)為科生物科技有限公司，位于上海長(zhǎng)江軟件園，公司目前具備較好的生物學(xué)、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，能夠?yàn)閺V大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測(cè)、合...

研究背景：結(jié)直腸癌是全球五大致命癌癥之一，在中國是第二大常見惡性腫瘤。肝轉(zhuǎn)移是患者預(yù)后不良的主要原因，25%的患者初診時(shí)已有肝轉(zhuǎn)移，術(shù)后15%-25%因肝轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，90%的肝轉(zhuǎn)移患者無法獲得有效治療，IV期患者5年生存率僅24%。N-糖基化修飾在蛋白質(zhì)的多種功能中起關(guān)鍵作用，且與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)，但目前關(guān)于結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的N-糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)研究較少。研究方法：收集14例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的原發(fā)性病灶和配對(duì)肝轉(zhuǎn)移病灶樣本，經(jīng)處理后進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）分析。對(duì)多...

腫瘤壞死因子（TNF）是一種促炎細(xì)胞因子，對(duì)維持組織穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。它通過與TNF受體1（TNFR1）結(jié)合，激活炎癥相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)控絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和核因子κB（NF-κB）通路，從而引發(fā)炎癥反應(yīng)。不過，TNF引發(fā)的細(xì)胞凋亡和壞死性凋亡也可能導(dǎo)致多種炎癥性疾病。受體相互作用絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1（RIPK1）是TNF信號(hào)通路中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，它能協(xié)調(diào)細(xì)胞的生存與死亡。RIPK1的支架功能可誘導(dǎo)炎癥和細(xì)胞存活，而其激酶功能則與凋亡和壞死性凋亡相關(guān)。近日，中國科學(xué)院上...

一、研究背景：胚胎發(fā)育中的“糖密碼”在生物學(xué)領(lǐng)域，蛋白質(zhì)功能受多種化學(xué)修飾調(diào)節(jié)，其中糖基化修飾備受關(guān)注。不同于復(fù)雜的細(xì)胞外糖鏈，O-GlcNAc（O-連接的N-乙酰葡萄糖胺）作為一種可逆的單糖修飾，廣泛存在于RNA聚合酶II、轉(zhuǎn)錄因子等關(guān)鍵蛋白上，以及在細(xì)胞內(nèi)數(shù)千種蛋白質(zhì)上發(fā)揮作用，涉及從糖酵解至細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄及翻譯等眾多基礎(chǔ)細(xì)胞活動(dòng)，可能介導(dǎo)基因表達(dá)對(duì)環(huán)境變化的響應(yīng)。哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育階段，會(huì)經(jīng)歷諸多代謝變化且依賴O-GlcNAc修飾相關(guān)酶存活。此前研究發(fā)現(xiàn)，負(fù)責(zé)添加O-...

激光共聚焦實(shí)驗(yàn)，或稱為激光共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn)，是一種基于激光共聚焦技術(shù)的高分辨率光學(xué)成像方法。激光共聚焦技術(shù)結(jié)合了激光的高單色性和高方向性，以及共聚焦原理，實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣本的高精度、高分辨率成像。在實(shí)驗(yàn)過程中，激光束通過顯微鏡的物鏡聚焦到樣本的特定區(qū)域，激發(fā)該區(qū)域內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光。隨后，熒光信號(hào)被顯微鏡的探測(cè)器收集并轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，通過計(jì)算機(jī)處理得到樣本的共聚焦圖像。激光共聚焦實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)涵蓋多個(gè)方面，以下是詳細(xì)介紹：1、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備樣品處理固定：根據(jù)樣品類型選擇合適的固定方法，...

乳酸是糖酵解的最終產(chǎn)物，作為碳源和信號(hào)分子，為腫瘤發(fā)展提供代謝、微環(huán)境和免疫基礎(chǔ)。最近，乳酸被重新定義為表觀遺傳學(xué)的標(biāo)志，通過組蛋白修飾實(shí)現(xiàn)免疫重塑和腫瘤進(jìn)展。然而，大多數(shù)非表觀遺傳蛋白的乳酸化及其功能尚未被充分研究。先天免疫系統(tǒng)通過多個(gè)模塊組成的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)來響應(yīng)入侵或細(xì)胞損傷。乳酸通過直接與MAVS結(jié)合抑制RLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，但乳酸對(duì)先天免疫反應(yīng)的胞質(zhì)DNA感應(yīng)的影響尚不清楚。cGAS被鑒定為感知胞質(zhì)DNA并觸發(fā)先天免疫反應(yīng)的關(guān)鍵酶，其活性和蛋白穩(wěn)定性受翻譯后修飾的調(diào)節(jié)。泛素...